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云南汉族基因多态性与精神分裂症及其攻击行为
作者:网站采编关键词:
摘要：下丘脑-垂体-肾上腺（hypothalamic-pituitary-adrenal，HPA）轴释放促肾上腺皮质激素释放激素（corticotrophin-releasing hormone，CRH）、促肾上腺皮质激素（adrenocorticotropic hormone，ACTH）和糖皮质激素
下丘脑-垂体-肾上腺（hypothalamic-pituitary-adrenal，HPA）轴释放促肾上腺皮质激素释放激素（corticotrophin-releasing hormone，CRH）、促肾上腺皮质激素（adrenocorticotropic hormone，ACTH）和糖皮质激素（glucocorticoid，GC），是应激反应的重要基础。当有害应激持续发生时，CRH功能亢进，皮质醇的水平和活性升高，精神分裂症患者ACTH、CRH水平高于正常对照组[1]，HPA轴急性应激能诱导患者攻击行为，与基底皮质醇负相关[2]。促肾上腺皮质激素释放激素结合蛋白（corticotropin-releasing hormone binding protein，CRHBP）通过与CRH结合影响HPA轴功能，与海马神经元的发育、细胞凋亡等神经行为相关联[3]。但目前有关CRHBP基因多态性与精神疾病及行为的相关性研究尚浅，且主要集中于抑郁症、自杀行为[4-5]。因此，本研究筛选CRHBP基因的4个标签单核苷酸多态性（tag single nucleotide polymorphism，Tag SNP）位点，在云南汉族群体中采用病例对照研究方法对其与精神分裂症及患者攻击行为的相关性进行探讨。
1 对象与方法
1.1 研究对象
本研究已获得昆明医科大学伦理委员会的批准，所有受试者或监护人均知情同意。
收集云南省石林县、宜良县无关个体163例为病例组（男性96例，女性67例），其中伴攻击行为（伴打人、骂人、毁物等攻击行为）81例，不伴攻击行为82例。诊断严格按照《精神障碍诊断及统计手册（第4版）》（Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders，the fourth revised edition，DSM-IV）[6]的标准执行，精神行为检查和评估均由云南省精神病医院两位副主任医师及副主任以上职称的专业精神科医生完成。
纳入标准：（1）云南汉族；（2）除烟草和咖啡因外，6个月内未有其他药物滥用史。排除标准：（1）肝肾代谢功能异常；（2）合并明显的躯体疾病、神经系统疾病和其他精神障碍；（3）除烟草和咖啡因外，6个月内有其他药物滥用史；（4）妊娠期或哺乳期妇女。
对照组来自云南省昆明市疾病预防控制中心健康体检的无关个体345例，无精神病史、酒精依赖史、药物滥用史且年满18周岁的健康云南籍汉族个体。
1.2 方法
1.2.1 DNA提取及引物设计
采用经典酚-氯仿法提取全血基因组DNA。根据HapMap数据库（ allel frequency，MAF）＞0.1的标准[7]，运用Haploview 4.2（美国Broad公司）筛选出CRHBP基因的4个Tag SNP（rs、rs、rs和rs），其野生型等位基因依次为G、T、G、G。引物及连接探针用Primer Premier 5.0（加拿大Premier公司）软件设计（表1）。
表1 4个SNP位点及其引物与探针序列Tab.1 The primers and probe sequences of 4 SNP注：SNP，单核苷酸多态性；rs，美国国家生物信息中心数据库对SNP的识别编号；F，上游引物；R，下游引物；RG，荧光标记G的下游探针；RA，荧光标记A的下游探针；RP，下游通用探针；FT，荧光标记T的上游探针；FC，荧光标记C的上游探针；FP，上游通用探针；FA，荧光标记A的上游探针。SNP位点rs PCR引物（5′→3′）F：CTCGACCCACACACATCCAGTG R：GGGCTCAGATGTGAGACGTGTG rsF：TTGCCTGGCTGTTGAAGCAGTT R：GGTTTCGTGCAGCTTCTCTCTTTC rsF：CTCAAATGATCCACCTGCCTTG R：TGGTTTAATGTTCTGCTGCATTTTCA rsF：AGGCAAAAAAGGCCGAGGAGAC R：CCCAGCAGGTTAGAAACCACACA PCR探针（荧光标记）序列RG：TCTCTCGGGTCAATTCGTCCTTGGTGGACCCCAGCACTCGT GC（NED）RA：TGTTCGTGGGCCGGATTAGTGGTGGACCCCAGCACTCGCGT（PET）RP：TTGTTGGGTTTTAATCATTTTTCCTCGTTTTTTTT FT：TACGGTTATTCGGGCTCCTGTTGTTGAAGCAGTTCTTGACAT TTTAAAGTAATAGGT（FAM）FC：TTCCGCGTTCGGACTGATATTGTTGAAGCAGTTCTTGACATT TTAAAGTAATAAGC（VIC）FP：GATGATATTTTTAAAAAATGAGAAAAATGGGTTTTTTTTTT FG：TTCCGCGTTCGGACTGATATTCTACTAGATCTCTTAATGAGC ACACTTCAATGTAG（FAM）FA：TACGGTTATTCGGGCTCCTGTTCTACTAGATCTCTTAATGAG CACACTTCAATGCAA（VIC）FP：AAGAGGATCACAGGCAAAATTGTGTTTTTTTT FG：TCTCTCGGGTCAATTCGTCCTTCACATGAGGAGAAAGACTG AATTCAAGTG（NED）FA：TGTTCGTGGGCCGGATTAGTCACATGAGGAGAAAGACTGA ATTCAAGTA（PET）FP：CACTATTCTATAACTAATTATAAGTTATAATAAAAATGTTTT
1.2.2 复合扩增体系建立
10 μL 扩增体系：5.13 μL 双蒸水（double distilled H2O，ddH2O）、1 μL 10×缓冲液（日本Takara公司）、0.6 μL Mg2+（25 mmol，德国Qiagen公司）、1.2 μL dNTP（2.5mmol，美国Promega公司）、1μL引物混合物（1.0 μmol，上海天昊生物科技有限公司）、0.07 μL HotStarTaq DNA聚合酶（5 U/μL，德国Qiagen公司）、1 μL DNA模板（1～5 ng/μL）。9700型PCR仪（美国Applied Biosystems公司）程序：94℃ 2min；94℃ 20s，65℃（每个循环下降0.5℃） 40 s，72℃ 30 s，循环11次；94℃ 20s，59℃ 30s，72℃ 1min，循环24次。
产物纯化：10 μL PCR产物、1 μL虾碱性磷酸酶（1U/μL，美国NEB公司）、0.05μL核酸外切酶（20U/μL，美国NEB公司），37℃ 1h，75℃ 15min。
文章来源：《云南地质》 网址: http://www.yndzzz.cn/qikandaodu/2021/0303/853.html